goldengate,一步克隆法原理

goldengate，一步克隆法原理？

一步法同源重组是一种利用同源重组的原理，进行无缝克隆的技术。该技术无需考虑酶切位点，几乎适用于任何载体与任何片段的定向克隆。操作过程简单快速，只需50℃，20min即可完成反应。

goldengate,一步克隆法原理

assembly无缝克隆原理和特点？

Golden gate 的方法跟传统的分子克隆的方法的优势相比在于可以实现片段的边切变边连,节省时间，同时可以连个多个片段的连接。

这方法之前应该是合成生物学尝试合成基因组的时候做的一个方法(好奇他们完全不把表观遗传放在眼里)，具体怎么来的可能要查下文献。

具体到原理：一般的内切酶分为三种，通常用的是2类的酶，识别特定的回文序列，并从中切开。而golden gate一般用的是3类酶，一般以bsmb 1，Bsa1, Bbs1这三种酶，识别特定的序列，并在特定序列以后隔几个任意的碱基切开，这样子就可以克服2类酶必须要回文序列才能用的缺点，实现片段的连接。

然后接下来是后面的连接酶，传统的连接酶是T4用的比较多，T4可以连接黏性末端跟平末端，而golden gate里用的是T7，它的特点是只能实现连接黏性末端。因为T7的这一特性，所以在连接的时候可以把片段跟切好的载体混到一种特殊的buffer里，在这里内切酶跟T7都可以保持比较高的活性，通过温度的调节，实现克隆的构建。因为用的是T7，所以不用担心PCR片段自连降低克隆效率，又因为是用的三类酶，可以通过黏性末端的设计，可以一种酶切多个片段，又不用担心这几个片段之间的乱连，来达到分子克隆的目的。

实际上T4跟传统的内切酶也可以来做golden gate

以桥为话题写一篇提纲？

I. Introduction

A. Definition and significance of bridges

B. Historical background of bridge construction

II. Types of Bridges

A. Arch bridges

B. Suspension bridges

C. Beam bridges

D. Cable-stayed bridges

III. Bridge Design and Construction

A. Structural elements and materials used

B. Engineering principles and calculations

C. Environmental considerations

IV. Famous Bridges around the World

A. Golden Gate Bridge, San Francisco

B. Tower Bridge, London

C. Sydney Harbour Bridge, Sydney

D. Pont du Gard, France

V. Bridges as Architectural Marvels

A. Unique and iconic bridge designs

B. Integration of bridges into urban landscapes

C. Bridges as tourist attractions

VI. Bridges as Symbols

A. Bridges as symbols of connection and unity

B. Cultural and historical significance of certain bridges

C. Bridges in literature, art, and popular culture

VII. Future of Bridge Construction

A. Advancements in bridge engineering technology

B. Sustainable and eco-friendly bridge designs

C. Challenges and opportunities in bridge construction

VIII. Conclusion

A. Recap of the importance and impact of bridges

B. Reflection on the role of bridges in connecting people and places.

世界上著名的桥有哪些？

1、伦敦塔桥

伦敦塔桥（Tower Bridge），是一座上开悬索桥，位于英国伦敦，横跨泰晤士河，因在伦敦塔（Tower of London）附近而得名，是从泰晤士河口算起的第一座桥（泰晤士河上共建桥15座），也是伦敦的象征。该桥始建于1886年，1894年6月30日对公众开放，将伦敦南北区连接成整体。

在19世纪下半叶，随着伦敦东区商业的上升发展，带动了对伦敦桥下游一座穿过泰晤士河的新桥梁的需求。但这座桥不能建成是传统的固定桥，因为将会切断当时位于伦敦桥和伦敦塔之间的港口设施，假如新桥太低的话船就无法开到码头了。1870年泰晤士河下的一条人行地道开通了，但它依然无法取代一座新的桥梁的需要。

2、金门大桥

金门大桥（英文：Golden Gate Bridge），峙于美国加利福尼亚州旧金山金门海峡之上，是世界著名的桥梁之一，也是近代桥梁工程的一项奇迹。桥身全长1900多米，历时4年，利用10万多吨钢材，耗资达3550万美元建成，由桥梁工程师约瑟夫·斯特劳斯（Joseph .Struss, 1870—1938年）设计。因其历史价值，英、美两国于2007年合拍同名纪录片。

3、布鲁克林大桥

纽约的布鲁克林大桥横跨纽约东河，连接着布鲁克林区和曼哈顿岛，1883年5月24日正式交付使用。大桥全长1834米，桥身由上万根钢索吊离水面41米，是当年世界上最长的悬索桥，也是世界上首次以钢材建造的大桥，落成时被认为是继世界古代七大奇迹之后的第八大奇迹，被誉为工业革命时代全世界七个划时代的建筑工程奇迹之一。

4、维琪奥桥

维琪奥桥(也称旧桥，Ponte Vecchio)建于1345年，为翡冷翠（是早年中国对佛罗伦萨的旧称）最古老的桥梁。“Vecchio”这个单词是古老的意思。维琪奥桥（Ponte Vecchio）上有二层楼的建筑，以前是乌菲兹宫通往隔岸碧提王宫的走廊。贯穿全城的阿尔诺河上，横跨着很多座造型优美的古桥，每座古桥都记录着一个昔日的传说。最为知名的是位于三圣桥下边的“旧桥”（ponte vecchio），那是阿尔诺河上的唯一的廊桥，像一条“空中走廊”，把乌菲齐美术馆和比蒂宫连成一体。这座饱经沧桑的老桥建于古罗马时期，1177和1333年曾两次受到洪水侵袭，只剩下两个大理石桥墩。现在这座造型典雅的三拱廊桥是1345年在原有的桥墩上重建而成，桥面过道两侧坐落着三层错落有致的楼房，桥面的中段两侧留有约20米宽的空间作为观景台，这一别开生面的设计使得整个大桥显得奔放而和谐。1944年夏天，在第二次世界大战中，阿尔诺河上的十座古桥中的其它九座都被纳粹军队炸毁了，唯独“旧桥”安然无恙。

5、雷雅托桥

雷雅托桥是威尼斯名桥，曾经历过多次改建。13世纪初建时，木质的雷雅托桥是大运河的第一座桥梁。雷雅托桥自中世纪时便是威尼斯的.贸易中心，来自世界各地的货品以水路运抵后都会在此交易。雷雅托桥作为商业中心的历史如此悠久，据说世界第一间银行就创立于此，连连莎士比亚名剧《威尼斯商人》的背景地也选在雷雅托桥。雷雅托桥高7米，宽55米，整座桥梁全以白色大理石建造。坐在游船上往桥的正面看去，雷雅托桥中央高大的人字形屋顶建筑两边，各有对称的6个“桥洞”，这就是雷雅托桥著名的商店街外廊。

6、杭州湾跨海大桥

杭州湾跨海大桥是一座横跨中国杭州湾的跨海大桥,是成千上万设计、工程学家和施工人员齐心协力、精诚合作的壮丽奇观。该桥北起浙江省嘉兴市海盐郑家埭，南至宁波市慈溪水路湾。杭州湾跨海大桥是继上海浦东东海大桥之后，中国改革后第二座跨海跨江大桥。从宁波到上海即可经过此桥。全长36公里，比连接巴林与沙特的法赫德国王大桥还长11公里，曾保持中国世界纪录协会世界最长的跨海大桥世界纪录，现为继美国的庞恰特雷恩湖桥和青岛胶州湾大桥之后世界第三长的跨海大桥。

7、皇家峡谷大桥

皇家峡谷大桥(The Royal Gorge Bridge)是靠近美国科罗拉多(Colorado)州Canon城的一个旅游景点。皇家峡谷大桥（The Royal Gorge Bridge）于1929年完工，造价30万美元，是世界上最高的吊桥，被列为国家历史名胜。皇家峡谷大桥的周围有很多现代的风景，包括世界上最高的过山车之一，会把游客运送到1200英尺的高空。皇家峡谷大桥这座吊桥建在被阿肯色河(Arkansas River)分隔开的1,053尺高的峡谷之上。虽然桥建于千尺深渊之上，坚固的桥身及精心设计的吊臂仍可负荷车辆在上面行驶。这样的画面虽不至于怵目惊心，倒也可堪称一绝。这座桥的建设从1929年6月5日开始到11月结束，仅用了6个月，并且在建设中没有出现人员伤亡。

8、悉尼大桥

悉尼大桥是一种单孔拱桥，曾号称世界第一单孔拱桥，是悉尼早期的代表建筑。这座大桥从1857年设计到1932年竣工，是连接港口南北两岸的重要桥梁。悉尼大桥有许多重要的意义，她是连接港口南北两岸的重要桥梁、是悉尼歌剧院明信片的完美背景、在距离水面147米的高处遥望悉尼歌剧院，这个角度绝对独一无二，也是摄取港口全景的绝佳地点。

9、查理大桥

查理桥始建于1357年，1400年竣工，横跨布拉格市伏尔塔瓦河。此桥是遵照捷克国王查理四世之命而建，因此得名查理桥，是捷克现存较大的古桥，也是连接布拉格老城、小城和布拉格城堡的交通要道。这段狭窄蜿蜒的街道聚集了许多旧城的精华，是当时加冕御道的一部分。查理桥以罗马天使桥为样板，是典型的哥特式建桥艺术与巴洛克雕塑艺术的完美结合。桥的一端入口处耸立着查理四世的全身雕像，两侧是带有巴洛克式浮雕的哥特式门楼。桥两侧石栏杆上有30座雕像，为天主教圣徒和保护神，造型有女神、武士、人面兽身和兽面人身像等。查理桥以其悠久的历史和独特的建筑艺术成为捷克较负盛名的古迹之一。

10、米洛大桥

米洛（MillauViaduct）大桥，坐落于法国南部，是法国连接巴黎到郎格多克海岸，甚至扩展与西班牙巴塞隆纳快速公路相连的A75公路计划的一部分，而米洛镇在这段路中居「瓶颈」位置，大桥跨越塔恩河（Tarn）河谷，桥下两端为拉尔札克高原和莱伟祖高原，有另一条快速公路蜿蜒其间，全长20英里，米洛大桥通车後，这段路行车时间从3小时缩短为10分钟。